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PG.NK无血清细胞冻存保护液产品介绍与使用说明


PG.NK细胞无血清冻存液

一、产品简介

 PG.NK细胞无血清冻存液是一款无动物血清、化学成分限定的冻存液产品。此产品使用针对人类NK /CAR-NK细胞冻存的特殊配方,能大大降低NK细胞在冻存过程中的损伤,提高细胞复苏后的得率和存活率,可用于NK细胞的长期保存。该冻存液不含动物血清,且化学成份明确,因而批次间质量稳定,适用于科研级NK细胞及医院样本库NK细胞的保存。 

二、产品信息

货号

名称

规格

PA-MA-0002

PG.NK无血清细胞冻存保护液

100mL

三、产品原理

该冻存液含多种保护剂成分,其中一些小分子保护剂,可渗透至细胞内,与水分子发生水合作用,避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞。同时也含有非渗透性大分子保护剂,可优先结合细胞外的水分子,降低细胞外溶液的电解质浓度,从而减少阳离子进入细胞的数量,能够使细胞免受溶质的损伤,大大提高细胞复苏存活率。 

四、保存条件

2-8℃ 保存,有效期6个月(暂定) 

五、操作步骤

1. 细胞冻存流程

1.1 待冻存细胞需处在对数生长期,且活率≥90%

1.2 混匀细胞悬液后取样计数,根据计数结果计算所需细胞悬液体积,将待冻存细胞悬液移入离心管中,300g离心5-10min

1.3 弃上清,用2-8℃ 保存的PG.NK细胞冻存液重悬细胞沉淀至1-2x107/ml

1.4 分装冻存细胞液入冻存管/袋中。放入程序降温盒,置于-80℃冰箱(更推荐使用程序降温仪,以1℃/min的降温速率降温到-80℃)。

1.5 24h后,将-80℃保存的冻存管/袋移入液氮罐中。

2. 细胞复苏流程

2.1. 取出细胞冻存管/袋,37℃水浴快速解冻。

2.2. 待冻存细胞完全融化后,可直接用于功能检测或动物注射实验。

2.3. 如需继续培养,以1ml冻存细胞为例,在已解冻的细胞悬液中加入1ml细胞培养基,轻柔混匀后移至装有8ml NK细胞培养基的离心管中,300g离心5min

2.4. 弃上清,加入适量新鲜培养基重悬细胞,轻柔混匀后移入事先准备好的培养容器中。

2.5. 根据研究需要进行常规培养。 

六、冻存相关数据

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细胞复苏后24h,细胞活率恢复正常,细胞开始快速生长。PG.NK细胞无血清冻存液与90% FBS+10% DMSO冻存液相比,复苏后细胞活率相当,液氮保存和-80℃保存相比,细胞活率差异不大。

七、说明

1. 冻存操作开始前,需对冻存液、冻存管、冻存袋及冻存盒进行4℃预冷。冻存过程中,为减少冻存保护剂对细胞的伤害,样本因尽量保持低温。在冻存分装后,也要缩短室温存放时间,尽快开始冻存程序。

2. 在复苏过程中,所使用的培养基需提前回温至室温。

3. 建议在复苏当天,增加培养密度(如2×106-4×106/ml),待细胞状态完全恢复后,再调整至适宜的培养密度。

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